中文简体
Bạn vừa chạy một phương pháp chuyển màu hoạt động hoàn hảo vào tuần trước. Các chất chuẩn hiệu chuẩn có vẻ rõ ràng, nhưng sắc ký đồ của mẫu cho thấy cực đại tăng thêm ở 23,8 phút. Bạn thay cột, chuẩn bị đệm mới và kiểm tra máy dò. Đỉnh cao vẫn còn đó. Sau đó, bạn trao đổi nước đi vào pha động và hiện vật biến mất. Đó là thực tế của sắc ký lỏng hiệu năng cao: độ tinh khiết của nước nằm bên dưới mỗi lần phân tách và khi nó thay đổi, phương pháp cũng thay đổi theo.
Độ tinh khiết của nước ảnh hưởng đến chất lượng dữ liệu HPLC theo bốn cách thực tế: độ ổn định cơ bản, hình dạng đỉnh, khả năng duy trì độ tái lập và tuổi thọ của thiết bị. Các chất gây ô nhiễm liên quan có thể là các phân tử hữu cơ, các ion hòa tan, các hạt hoặc vi khuẩn. Ngay cả một lượng nhỏ của một loại tạp chất cũng có thể gây ra hậu quả không tương xứng với nồng độ của nó.
Tác dụng chính của độ tinh khiết của nước đối với HPLC
Trong hệ thống HPLC, nước là thuốc thử, không phải là chất nền thụ động. Nó mang đệm, hòa tan mẫu và góp phần tạo nền cho máy dò. Do đó, các tạp chất trong nước sẽ di chuyển trực tiếp vào tín hiệu phân tích. Bảng dưới đây tóm tắt các chất gây ô nhiễm phổ biến nhất và tác động của chúng.
| chất gây ô nhiễm | Ví dụ hoặc Nguồn | Tác dụng trong HPLC |
|---|---|---|
| Chất hữu cơ hòa tan | Chất humic, chất làm dẻo, cặn tẩy rửa, hơi dung môi | Đỉnh ma hấp thụ tia cực tím, độ lệch đường cơ sở, thay đổi lưu giữ |
| Ion vô cơ | Natri, clorua, silicat, kim loại vi lượng | Thay đổi độ dẫn điện, nhiễu trong sắc ký ion và LC-MS, mở rộng pic liên quan đến kim loại |
| hạt | Hạt nhựa, bụi, kết tủa | Frit bị tắc, áp suất ngược tăng, phớt bơm bị mòn, đường cơ sở ồn ào |
| Khí hòa tan | Oxy, carbon dioxide, nitơ | Bong bóng trong máy dò, đường nền tăng đột biến, độ trôi pH |
| Vi sinh vật | Vi khuẩn và màng sinh học trong thùng chứa | Cột bị tắc, frit bị tắc, pic giả, phương pháp không ổn định |
Những hiệu ứng này không chỉ là lý thuyết. Màng sinh học vi sinh vật trong bể chứa nước có thể giải phóng các chất chuyển hóa hấp thụ tia cực tím và một khi màng đó hình thành, việc thay nước đơn giản có thể không giải quyết được vấn đề cho đến khi bể chứa được làm sạch và vệ sinh.
"Cấp HPLC" và nước loại 1 thực sự có ý nghĩa gì
Hầu hết các phương pháp phân tích đều yêu cầu nước đáp ứng các thông số kỹ thuật Loại 1. Về mặt thực tế, điều đó có nghĩa là điện trở suất ở 25 độ C là khoảng 18,2 megohm-cm, độ dẫn điện gần 0,055 microsiemen trên mỗi cm và tổng lượng cacbon hữu cơ đủ thấp để nước không tạo ra phông UV hoặc MS có thể nhìn thấy được. Chỉ riêng điện trở suất là không đủ. Bạn cũng cần biết mức TOC, số lượng hạt và trong một số ứng dụng, giá trị silicat hoặc natri.
Độ pH của nước tinh khiết không phải là một thông số hữu ích. Nước siêu tinh khiết hầu như không có khả năng đệm và nhanh chóng hấp thụ carbon dioxide từ không khí, do đó độ pH đo được khoảng 5,6 chỉ phản ánh lượng CO2 hòa tan. Độ pH quan trọng là độ pH của pha động đệm mà bạn chuẩn bị.
Yêu cầu về chất lượng nước cũng phụ thuộc vào máy dò. Phát hiện tia cực tím ở bước sóng 210 nm đặc biệt nhạy cảm với ô nhiễm hữu cơ vì nhiều liên kết cacbon-oxy và cacbon-nitơ hấp thụ ở đó. LC-MS cần nước có hàm lượng tạp chất không bay hơi rất thấp để tránh sự ức chế ion và hình thành chất gây nghiện. Máy dò bay hơi cũng bị ảnh hưởng tương tự bởi ô nhiễm không bay hơi vì nó làm tăng tín hiệu nền. Do đó, nước loại 1 là điểm khởi đầu hợp lý cho hầu hết mọi ứng dụng HPLC.
Nước cấp HPLC đóng chai có thể hoạt động nhưng phải được bảo quản và xử lý đúng cách. Kiểm tra giấy chứng nhận phân tích, ghi lại số lô và đừng bao giờ cho rằng thùng chứa cũ không có sự phát triển sinh học.
Rửa giải gradient làm cho tạp chất nước có thể nhìn thấy được
Tạp chất nước dễ thấy nhất trong phương pháp gradient. Trong quá trình chạy đẳng cấp, chất gây ô nhiễm hấp thụ tia cực tím có thể chỉ cần nâng đường cơ sở lên một chút. Trong một gradient, phần nước bắt đầu ở mức cao và phần dung môi hữu cơ tăng theo thời gian. Các chất ô nhiễm có thể được giữ lại ở đầu cột và sau đó được rửa giải khi hàm lượng hữu cơ tăng lên. Điều này tạo ra các đỉnh ma và đường cơ sở trôi dạt có thể cản trở việc tích hợp và định lượng.
Đó là lý do tại sao gradient trống là một trong những cách kiểm tra chất lượng nước đơn giản nhất. Chạy gradient chính xác của bạn mà không cần tiêm mẫu. Nếu xuất hiện các pic trong mẫu trắng thì pha động bị nghi ngờ.
Thói quen hàng ngày bảo vệ độ tinh khiết của nước
Nước tinh khiết không phải lúc nào cũng tinh khiết một cách tình cờ. Những thói quen sau đây ngăn ngừa những vấn đề thường gặp nhất trong thực hành HPLC.
- Sử dụng nước từ hệ thống lọc có hộp mực mới, đèn UV đang hoạt động và khử trùng thường xuyên.
- Thu nước vào thùng sạch có nắp đậy. Không để thùng chứa mở trong khi hệ thống đang chạy.
- Không trữ nước trong nhiều ngày. Chuẩn bị pha động với nước sạch ngay trong ngày nếu có thể.
- Tránh thêm nước ngọt vào hồ chứa đã đầy một phần. Thay thế lượng chứa trong bình thay vì đổ thêm vào.
- Chạy gradient trắng ở bước sóng được sử dụng để phân tích và ghi lại kết quả.
- Ghi lại điện trở suất, TOC và ngày lấy nước vào hồ sơ phân tích của bạn.
Đối với các phòng thí nghiệm sử dụng nước đóng chai, các quy tắc tương tự cũng được áp dụng. Kiểm tra ngày hết hạn, đóng hộp ngay sau khi sử dụng và không đổ lại nước chưa sử dụng từ cốc vào chai.
Phụ gia biến vấn đề về nước thành vấn đề về phương pháp
Pha động hiếm khi chỉ chứa nước. Muối đệm, axit, thuốc thử cặp ion và một số chất biến tính chuyên dụng được thêm vào ở nồng độ tương đối thấp. Nếu nước có chứa tạp chất hấp thụ tia cực tím, những tạp chất đó có thể không làm thay đổi dung lượng đệm nhưng chúng vẫn có thể xuất hiện trong tín hiệu máy dò.
Chất lỏng ion đôi khi được sử dụng làm chất điều chỉnh pha động để cải thiện hình dạng hoặc độ chọn lọc của pic. Khi bạn chọn một loại, tiêu chuẩn về độ tinh khiết tương tự sẽ được áp dụng. Ví dụ, 1-etyl-3-metylimidazolium tetrafluoroborat là chất lỏng ion phổ biến cho các nghiên cứu sắc ký. Nó phải được hòa tan trong nước đã đáp ứng thông số kỹ thuật Loại 1; nếu không, chất phụ gia sẽ trở thành một nguồn ô nhiễm khác. Nếu bạn muốn hiểu các đặc tính liên quan đến sự phân tách của các hợp chất này, chúng tôi tổng quan về cách chất lỏng ion hoạt động trong quá trình tách bao gồm các biến thực tế.
CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Nhà cung cấp chất lỏng Ldet Technology là nhà cung cấp CAS: 143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate tùy chỉnh của Trung Quốc và 1 -Ethyl-3-methylim... Xem sản phẩm → Sự tinh khiết bắt đầu với nhà cung cấp
Tại Chiết Giang Ldet, chúng tôi sản xuất chất lỏng ion và hóa chất đặc biệt. Chúng tôi biết từ quá trình sản xuất rằng một lượng nhỏ tạp chất trong nguyên liệu ban đầu có thể làm thay đổi hiệu suất sau này. Đó là lý do tại sao chúng tôi kiểm tra hàm lượng nước, lượng halogenua dư và phản ứng tia cực tím trước khi sản xuất. Nguyên tắc tương tự áp dụng trong phòng thí nghiệm HPLC: chọn vật liệu đi kèm với các thông số kỹ thuật được ghi lại. Ví dụ, 1-butyl-3-metylimidazolium tetrafluoroborat có sẵn dữ liệu về độ tinh khiết cho phép bạn đánh giá xem nó có tương thích với phương pháp phát hiện của bạn hay không.
CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate Nhà cung cấp chất lỏng Ldet Technology là CAS tùy chỉnh của Trung Quốc: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate Nhà cung cấp chất lỏng và 1-Butyl-3-methylimid... Xem sản phẩm → Những điều cần kiểm tra trên Giấy chứng nhận Phân tích
- Hàm lượng halogenua dư, vì halogenua có thể ảnh hưởng đến sự phân tách trao đổi ion và ăn mòn.
- Hàm lượng nước, vì nước làm thay đổi nồng độ hiệu quả của chất phụ gia.
- Phổ UV hoặc ngưỡng UV để bạn có thể dự đoán độ hấp thụ nền.
- Tính nhất quán giữa các lô, vì lô mới sẽ không âm thầm thay đổi phương pháp của bạn.
Nếu bạn cần trợ giúp để kết hợp vật liệu với một phương pháp, bạn có thể thảo luận về dữ liệu độ tinh khiết và các yêu cầu tùy chỉnh với nhóm kỹ thuật của chúng tôi .
Xử lý nước như một phần của phương pháp
Độ tinh khiết của nước trong HPLC không phải là thiết lập một lần. Đó là một biến số hàng ngày có thể thay đổi theo mùa, chai bảo quản và tình trạng của hệ thống lọc. Sử dụng nước Loại 1, xác nhận TOC và điện trở suất, xử lý đúng cách và chọn chất phụ gia có khả năng truy xuất nguồn gốc. Trong một phương pháp được xây dựng trên nanogram chất phân tích, nước không bao giờ "chỉ là nước".
